Molecularly imprinted polymer beads for clean-up and preconcentration of ß-lactamase-resistant penicillins in milk.

This work describes the development and application of class-selective molecularly imprinted polymers (MIPs) for the analysis of beta-lactamase-resistant penicillins, namely cloxacillin (CLOXA), oxacillin (OXA), and dicloxacillin (DICLOXA), in milk samples. Our method is based on molecularly imprinted solid-phase extraction (MISPE) coupled to high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode-array detection (DAD). 2-Biphenylylpenicillin (2BPEN), a surrogate with a close resemblance to beta-lactamase-resistant penicillins in terms of size, shape, hydrophobicity, and functionality, was synthesized and used as the template for the polymer synthesis. A MIP library was prepared and screened to select the optimum functional monomer, N-(2-aminoethyl)methacrylamide, and cross-linker, trimethylolpropane trimethacrylate, that provided the best recognition for the target antibiotics. For the MISPE application, the MIPs were prepared in the form of microspheres, using porous silica beads (40-75 µm) as sacrificial scaffolds. The developed MISPE method enables efficient extraction from aqueous samples and analysis of the antimicrobials, when followed by a selective washing with 2 mL acetonitrile-water (20:80 v/v) and elution with 1 mL 0.05 mol L(-1) tetrabutylammonium in methanol. The analytical method was validated according to EU guideline 2002/657/EC. The limits of quantification (S/N = 10) were in the 5.3-6.3 µg kg(-1) range, well below the maximum residue limits (MRLs) currently established. Inter-day mean recoveries were in the range 99-102 % with RSDs below 9 %, improving on the performance of previously reported MISPE methods for the analysis of CLOXA, OXA, or DICLOXA in milk samples.

Isolation, enumeration, molecular identification and probiotic potential evaluation of lactic acid bacteria isolated from sheep milk

Lactic acid bacteria species were molecularly identified in milk from Lacaune, Santa Inês and crossbred sheep breeds and their in vitro probiotic potential was evaluated. The species identified were Enterococcus faecium (56.25%), E. durans (31.25%) and E. casseliflavus (12.5%). No other lactic acid bacteria species, such as lactobacilli, was identified. Most of the isolated enterococci were resistant to gastric pH (2.0) and to 0.3% oxgall. All tested enterococci were resistant to ceftazidime, oxacillin and streptomycin and sensible to clindamycin, erythromycin and penicillin. The resistance to ciprofloxacin, gentamicin, tetracycline and vancomycin varied among tested species. All tested enterococci strongly inhibited (P<0.05) Escherichia coli and Listeria monocytogenes, moderately inhibited E. faecalis and Staphylococcus aureus and did not inhibit Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium and also one E. durans sample isolated from sheep milk. Four samples of E. faecium, one of E. durans and one of E. casseliflavus presented the best probiotic potential...

Espécies de bactérias ácido-lácticas foram identificadas em nível molecular em leite das raças ovinas Lacaune, Santa Inês e suas mestiças, e o seu potencial probiótico in vitro foi avaliado. As espécies identificadas foram Enterococcus faecium (56,25%), E. durans (31,25%) e E. casseliflavus (12,5%). Nenhuma outra espécie de bactéria ácido-láctica, como Lactobacillus sp., foi identificada. A maioria dos enterococos isolados foi resistente ao pH gástrico (2.0) e a 0,3% de oxgall. Todos os enterococos testados foram resistentes à ceftazidima, oxacilina e estreptomicina e sensíveis à clindamicina, eritromicina e penicilina. A resistência à ciprofloxacina, gentamicina, tetraciclina e vancomicina variou entre as amostras. Todos os enterococos testados inibiram fortemente (P<0,05) Escherichia coli e Listeria monocytogenes, inibiram moderadamente E. faecalis e Staphylococcus aureus e não inibiram Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enterica var. Typhimurium e uma amostra de E. durans isolada de leite de ovelha. Quatro amostras de E. faecium, uma de E. durans e uma de E. casseliflavus apresentaram o melhor potencial probiótico...

Atividade antibacteriana de extrato de gervão frente cepas de Staphylococcus aureus oxacilina-sensíveis e oxacilina-resistentes isoladas de amostras biológicas / Antibacterial activity of gervão extract against Staphylococcus aureus oxacillin-sensible and oxacillin-resistant strains isolated from biological samples

Gervão (Stachytarpheta cayennensis (Rich.) Vahl) é uma planta pertencente à família Verbenaceae amplamente utilizada na medicina popular no município de Buriticupu-MA no tratamento das lesões leishmanióticas. Essas lesões geralmente vêm acompanhadas de infecção bacteriana secundária, porém a literatura não registra o efeito desta planta sobre bactérias. Este trabalho investiga a atividade antibacteriana do gervão coletada em Buriticupu – MA. O extrato bruto hidroalcoólico (EBH) obtido de partes aéreas da planta foi submetido a avaliação da atividade antibacteriana in vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus oxacilina-sensíveis eoxacilina-resistentes. A atividade antibacteriana foi avaliada através da técnica de difusão com disco e diluição em caldo. O EBH apresentou halo de inibição até a concentração de 12,5 mg/mL. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentraçãobactericida mínima (CBM) para o EBH se deram frente às cepas de Staphylococcus aureus. O EBH apresentou CIM variando de 0,4 a 1,6 mg/mL e CBM de 1,6 a 12,5 mg/mL. Os resultados indicam que a planta tem moderada atividade antibacteriana.

Valoración in vitro de discos para antibiogramas de producción nacional / In vitro assessment of discs for antibiograms of national production

Se realizó la valoración in vitro de discos de antibióticos para antibiogramas producidos por primera vez en nuestro país. Estos correspondieron a ceftriaxoma, cefotaxima, cefazolina, cefuroxima, ceftazidima, ciprofloxacina, vancomicina y oxacillín. Dicha valoración comprendió la actividad in vitro de los discos, así como la determinación del grado de estabilidad de éstos. Fueron utilizadas 911 cepas bacterianas, incluidas bacterias gammnegativas y grampositivas, aisladas en pacientes del hospital. Se determinó que la ciprofloxacina fue el antibiótico más efectivo de todos. De forma global los antibióticos probados tuvieron muy buena actividad inhibitoria frente a bacterias grampositivas y en menor grado frente a gramnegativas. Se compararon los resultados obtenidos usando discos de producción nacional de 4 antibióticos y sus similares de producción extranjera. La ceftriaxona y la ceftaxioma nacionales alcanzaron mejores resultados, en oxacillín los resultados fueron idénticos en ambos y sólo en ciprofloxacina los discos nacionales tuvieron resultados ligeramente inferiores. Se comprobó que los discos probados mantuvieron su potencia a lo largo del estudio y no sufrieron alteraciones en su estado físico